Получение рекомбинантных ДНК. Суть конструирования рекомбинантных ДНК заключается во встраивании фрагментов ДНК, среди которых находится интересующий нас участок ДНК, в так называемые векторные молекулы ДНК или векторы - плазмидные или вирусные ДНК, которые могут быть перенесены в клетки про- или эукариот и там автономно репли-цироваться.
На следующем этапе проводится отбор тех клеток, которые несут в себе рекомбинантные ДНК с маркерных признаков, которыми обладает сам вектор, и затем индивидуальных клонов с интересующим нас сегментом ДНК используя признаки или пробы, специфичные для данного гена или участка ДНК . При решении ряда научных и биотехнологических задач конструирование рекомбинантных ДНК требует также создания систем, в которых обеспечивается максимальная экспрессия клонируемого гена. Существует три основных встраивания чужеродной ДНК в векторные молекулы.
В первом случае 3 -концы фрагментов ДНК, среди которых находится интересующий нас участок ДНК ген или его сегмент, регуляторный район, с фермента терминальной нуклеотидилтрансферазы наращиваются гомополинуклеотидной последовательностью например, поли Т . 3 -концы линейной формы векторной ДНК тем же наращиваются комплементарной ей гомополинуклеотидной последовательностью то есть поли А . Это позволяет соединить две молекулы ДНК путем комплементарного спаривания искусственно полученных липких концов. Во втором случае липкие концы создаются с расщепления молекул ДНК как векторной, так и содержащей интересующий нас фрагмент одной из эндонуклеаз рестрикции рестриктаз. Рестриктазы характеризуются исключительно высокой специфичностью.
Они узнают в ДНК последовательность из нескольких нуклеотидных остатков и расщепляют в них строго определенные межнуклеотидные связи.
Объяснение:
Поделитесь своими знаниями, ответьте на вопрос:
Сколько зайчиков спряталось в кустах, если видно 3 торчащих уха?